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BIOHUB品牌PEI轉(zhuǎn)染試劑

簡要描述:上海起發(fā)自產(chǎn)線性PEI轉(zhuǎn)染試劑

PEI轉(zhuǎn)染注意要點

化學(xué)名:線性聚乙烯亞胺,線性PEI,聚乙烯亞胺,線性,MW 25000,轉(zhuǎn)染級

訂貨號#: 9002-98-6 規(guī)格:1G 品牌:BIOHUB CAS#: 9002-98-6,26913-06-4

分子式:(CH2CH2NH)n 分子量: 25,000

  • 產(chǎn)品型號:78pei25000
  • 廠商性質(zhì):經(jīng)銷商
  • 更新時間:2024-09-03
  • 訪  問  量:18508

詳細(xì)介紹

品牌其他品牌CAS9002-98-6
分子式CH2CH2NH分子量MW 25000
貨號78pei25000規(guī)格100mg`5g
供貨周期現(xiàn)貨主要用途細(xì)胞轉(zhuǎn)染
應(yīng)用領(lǐng)域醫(yī)療衛(wèi)生,環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè)

 

BIOHUB品牌性PEI轉(zhuǎn)染試劑說明書

BIOHUB品牌

PEI轉(zhuǎn)染注意要點 

化學(xué)名:線性聚乙烯亞胺,線性PEI,聚乙烯亞胺,線性,MW 25000,轉(zhuǎn)染級

訂貨號  9002-98-6   規(guī)格:1G  品牌:BIOHUB       CAS  9002-98-6,26913-06-4        

分子式:(CH2CH2NH)n      分子量: 25,000      熔點: 73-75º 

溶于:熱水,低pH冷水,甲醇和乙醇。    不溶于:苯,乙酉迷和丙酮   

外觀:白色至黃色固體       處理手套和通風(fēng)櫥

儲存:在室溫下避光干燥儲存

配置:1:稱取100mg線性聚乙烯亞胺,加新鮮的細(xì)胞級別的水90ml,加鹽酸至PH=3左右, 加熱至80℃左右攪拌過夜溶解PEI,

2:用氫氧化鈉溶液調(diào)整pH值至7.0 ,定容至100ml,用0.22um的濾器過濾,分裝后儲存于4℃,保質(zhì)期可以達(dá)到12個月。

轉(zhuǎn)染操作流程:

◆ 瞬時轉(zhuǎn)染方法  1. 接種細(xì)胞: 轉(zhuǎn)染前一天,用膠原酶(WORTHINGTONG公司LS004196)消化細(xì)胞并計數(shù)(不建議用胰酶)。調(diào)整細(xì)胞濃度,將細(xì)胞鋪入細(xì)胞培養(yǎng)的器皿,每個孔置入的細(xì)胞量應(yīng)能使轉(zhuǎn)染時細(xì)胞匯合度達(dá)到 70~80%。

2. 準(zhǔn)備 DNA-PEI 復(fù)合物: DNA、PEI 試劑和稀釋劑在進(jìn)行以下步驟前需先使其升至室溫。,用 Opti-MEM ITM(Invitrogen)或其他適合的無蛋白培養(yǎng)基稀釋適量 DNA。用同樣的培養(yǎng)基稀釋 PEI 試劑。每 1 μg DNA 需用 1-5 μL 線性PEI轉(zhuǎn)染試劑。一邊輕輕渦旋裝有 DNA 溶液 的試管,一邊將稀釋的線性PEI轉(zhuǎn)染試劑滴加至試管中(注意:請勿顛倒添加順序)。充分混勻后,室溫靜置 10~25 min 以形成 DNA-PEI復(fù)合物。當(dāng)溶液體積較大時,請用圓底聚丙烯管,例如 NEST  5 mL /14 mL 離心管。

3. 轉(zhuǎn)染細(xì)胞: 直接向每個孔中加入 DNA-PEI復(fù)合物并輕輕渦旋培養(yǎng)板/培養(yǎng)皿。在無血清條件下轉(zhuǎn)染時,去除生長培養(yǎng)基,替換成無血清培養(yǎng)基,然后滴DNA-PEI復(fù)合物。轉(zhuǎn)染 3 h 后,添加½體積的包含 30%血清的生長培養(yǎng)基。

4. 孵育細(xì)胞和分析結(jié)果: 在 CO2培養(yǎng)箱中 37下孵育細(xì)胞至可以分析檢測。轉(zhuǎn)染后快 7 h 即可檢測到轉(zhuǎn)入基因的表達(dá)。 請自行確定適合檢測時間。

穩(wěn)定轉(zhuǎn)染方法

1. 接種細(xì)胞: 轉(zhuǎn)染前一天,用膠原酶(WORTHINGTONG公司LS004196)消化細(xì)胞并計數(shù)(不建議用胰酶)。調(diào)整細(xì)胞濃度,將細(xì)胞鋪入細(xì)胞培養(yǎng)的器皿,每個孔置入的細(xì)胞量應(yīng)能使轉(zhuǎn)染時細(xì)胞匯合度達(dá)到 70~80%。

2. 準(zhǔn)備 DNA-PEI 復(fù)合物: DNA、PEI 試劑和稀釋劑在進(jìn)行以下步驟前需先使其升至室溫。依據(jù)表 1 所示,用 Opti-MEM ITM(Invitrogen)或其他適合的無蛋白培養(yǎng)基稀釋適量 DNA。用同樣的培養(yǎng)基稀釋 PEI 試劑。每 1 μg DNA 需用 1-5 μL 線性PEI轉(zhuǎn)染試劑(這個需要客戶自行摸索配比,每一批轉(zhuǎn)染試劑和每一批DNA比例可能會稍有不同)。一邊輕輕渦旋裝有 DNA 溶液的試管,一邊將稀釋的線性PEI轉(zhuǎn)染試劑滴加至試管中(注意:請勿顛倒添加順序)。充分混勻后,室溫靜置 10~25 min 以形成 DNA-PEI復(fù)合物。當(dāng)溶液體積較大時,請用圓底聚丙烯管,例如 NEST  5 mL /14 mL 離心管。

3. 轉(zhuǎn)染細(xì)胞: 直接向每個孔中加入 DNA-PEI復(fù)合物并輕輕渦旋培養(yǎng)板/培養(yǎng)皿。在無血清條件下轉(zhuǎn)染時,去除生長培養(yǎng)基,替換成無血清培養(yǎng)基,然后滴DNA-PEI復(fù)合物。轉(zhuǎn)染 3 h 后,添加½體積的包含 30%血清的生長培養(yǎng)基。

4. 孵育細(xì)胞和分析結(jié)果: 在 CO2培養(yǎng)箱中 37下孵育細(xì)胞至可以分析檢測。轉(zhuǎn)染后 7 h 即可檢測到轉(zhuǎn)入基因的表達(dá)。

5.轉(zhuǎn)染 24 h 后,將細(xì)胞傳代至新鮮的生長培養(yǎng)基中(將細(xì)胞稀釋 10 倍 以上),在 CO2培養(yǎng)箱中 37孵育過夜。第二天加入與轉(zhuǎn)染抗性基因相匹配的篩選藥物。約 1~2 周可 篩選到耐藥性克隆,在這期間需經(jīng)常更換含篩選藥物的生長培養(yǎng)基。 

上海起發(fā)自產(chǎn)線性PEI轉(zhuǎn)染試劑特別提醒

1PEI 25K含有4-11%的殘留丙?;@可能阻礙聚合物主鏈與DNA的有效結(jié)合,所以批間轉(zhuǎn)染效率可能會有比較大的差異,建議一個批次可以多購買,PEI 25K穩(wěn)定性在室溫干燥避光下可穩(wěn)定保存10年以上(雖然有效期標(biāo)注只有18個月左右)

2. 對于某些類型的細(xì)胞如 HEK-293、HEK293T、NIH/3T3 和 COS 細(xì)胞,在轉(zhuǎn)染前兩天鋪板可顯著 提高轉(zhuǎn)入基因的表達(dá)水平。如果選擇轉(zhuǎn)染前兩天鋪板,可適當(dāng)降低鋪板密度,以確保轉(zhuǎn)染時細(xì)胞的匯合度仍為 70~80%。

3. 對于接觸抑制敏感的細(xì)胞,可適當(dāng)降低鋪板密度。

4. 即使在有蛋白(如 10%的血清)存在的情況下,DNA-PEI復(fù)合物仍能轉(zhuǎn)染細(xì)胞,但是 DNA-PEI復(fù)合物必須在無蛋白存在的條件下形成。我們推薦使用 Opti-MEM ITM 培養(yǎng)基以達(dá)到宜轉(zhuǎn)染效率。其他的無蛋白培養(yǎng)基則需測試與線性PEI轉(zhuǎn)染試劑的兼容性。

5. 對大多數(shù)細(xì)胞來而言,每 1 μg DNA 使用 3.0 μL PEI轉(zhuǎn)染試劑都能獲得較高轉(zhuǎn)染效率。使用 者也可嘗試每 1 μg DNA 使用 1~4 μL 體積線性PEI轉(zhuǎn)染試劑進(jìn)行優(yōu)化。

6.本手冊只是一個基本操作手冊,具體轉(zhuǎn)染過程中需要根據(jù)實驗進(jìn)行優(yōu)化,優(yōu)化方向為混合時間,轉(zhuǎn)染時間,DNA混合比列.......

7.Polyethylenimine, Linear (MW 25,000) 為Polysciences公司生產(chǎn)的化合物產(chǎn)品,每批產(chǎn)品出廠前都經(jīng)過嚴(yán)格的檢測,保證每批產(chǎn)品都*、穩(wěn)定且高品質(zhì),但由于作為轉(zhuǎn)染試劑使用過程中有很多實驗室因素(配置方法,PH,水純度,稱量的準(zhǔn)度,dna RNA純度,細(xì)胞狀態(tài),細(xì)胞品系…)造成溶解出現(xiàn)問題或者轉(zhuǎn)染效率出現(xiàn)差異,所以廠家只受理該產(chǎn)品純度,分子量及重量缺失破損等相關(guān)投訴,針對極個別客戶溶解問題和轉(zhuǎn)染效率問題我們只能友善解決,所以不能保證您能獲得滿意答復(fù),對于產(chǎn)品產(chǎn)品轉(zhuǎn)染效率不高,轉(zhuǎn)染批間有差異,轉(zhuǎn)染不了等問題,不作為評價我們售后工作的依據(jù)。
    如果我們提供的PEI手冊都無法解答您的問題,建議您可以多看文獻(xiàn),多調(diào)整一下轉(zhuǎn)染條件,找出適合自己細(xì)胞的轉(zhuǎn)染方法。如果無暇摸索條件,您也可以直接購買我們配置好細(xì)胞轉(zhuǎn)染液,這樣免去您很多煩惱,謝謝理解

8.部分?jǐn)?shù)據(jù)參考,本數(shù)據(jù)來源于網(wǎng)絡(luò),不作為售后投訴依據(jù)

上海起發(fā)自產(chǎn)線性PEI轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn)染試劑和DNA配比數(shù)據(jù)

細(xì)胞型號

培養(yǎng)基

每孔細(xì)

胞數(shù)

DNA的量

轉(zhuǎn)染試劑量

和培養(yǎng)基混合 4-6h

293H

DMEM

3×104

0.2µg

0.5µL

DMEM+10?S

293FT

DMEM

3×104

0.2µg

0.5µL

DMEM+10?S

293E

DMEM

3×104

0.2µg

0.5µL

DMEM+10?S

293F

DMEM

3×104

0.2µg

0.5µL

DMEM+10?S

COS7

DMEM

1.5×104

0.4µg

0.5µL

DMEM+10?S

hela

DMEM

2×104

0.3µg

0.5µL

1640+15?S

Caco2

MEM

3.5×104

0.3µg

0.75µL

MEM+10?S

BHK21

MEM

2×104

0.2µg

0.5µL

MEM+10?S

CHO-DG44

DMEM+HT+pro

2×104

0.5µg

0.5µL

DMEM+HT+pro +10?S

RAW264.7

DMEM

3×104

0.2µg

0.5µL

DMEM +10?S

MCF7

MEM/NEAA+0.01mg/mL insulin + sodium pyruvat

2×104

0.1µg

0.25µL

MEM/NEAA+0.01mg/mL insulin + sodium pyruvat+10?S

SW480

IMDM

3×104

0.4µg

0.5µL

IMDM +10?S

MDCK

DMEM

4×104

0.6µg

1µL

DMEM+10?S

CHO-K1

IMDM+Pro

3×104

0.2µg

0.5µL

IMDM+Pro +10?S

HepG2

DMEM

3×104

0.5µg

0.75µL

DMEM+10?S

A549

DMEM

2×104

0.3µg

0.5µL

DMEM+10?S

NIH/3T3

DMEM

1.5×104

0.1µg

0.75µL

DMEM+10?S

vero

DMEM

3×104

0.3µg

0.75µL

DMEM+10?S

sf9

SIM SF

5×104

0.4µg

0.75µL

SIM SF+10?S

轉(zhuǎn)染效率

細(xì)胞種類

中文名稱

PEI 轉(zhuǎn)染效率

HEK293

人胚腎細(xì)胞

90%-95%

293-T

人胚腎細(xì)胞

90%-95%

CHO-K1

倉鼠卵巢細(xì)胞

80%-90%

U251

人源神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞

80%-90%

Hela

人源宮頸癌細(xì)胞

70%-80%

COS7

猴SV40轉(zhuǎn)化腎細(xì)胞

70%-80%

HepG2

人源肝癌細(xì)胞

70%-80%

NIH/3T3

小鼠胚胎成纖維細(xì)胞

60%-70%

膠質(zhì)瘤干細(xì)胞

人源膠質(zhì)瘤干細(xì)胞

60%-70%

Patu8988

人源胰腺癌細(xì)胞

60%-70%

U2OS

人源骨肉瘤細(xì)胞

60%-70%

上海起發(fā)自產(chǎn)線性PEI轉(zhuǎn)染試劑價格表

貨號

品名

規(guī)格

品牌.

23966-1

Polyethylenimine, Linear (MW 25,000)

1g

polysciences

78pei25000 線性聚乙烯亞胺 分子量25000 100mg biohub
78pei25000 線性聚乙烯亞胺 分子量25000 1g  biohub
78pei25000 線性聚乙烯亞胺 分子量25000  5g  biohub
 

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